摘要： 考馬斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合，在0－1000ug/ml范圍內(nèi)，于波長595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，可用于蛋白質(zhì)含量的測定?？捡R斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合迅速，結(jié)合產(chǎn)物在室溫下10分鐘內(nèi)較為穩(wěn)定，是一種較好的蛋白質(zhì)定量測定方法。 1. 實(shí)驗(yàn)部分 1.1 儀器與試劑：Labtech UV POWER紫外分光光度計(jì)；玻璃比色皿一套；考馬斯亮藍(lán)G250； 牛血清蛋白；超純水。 1.2 試液的制備： 牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000ug/ml）的制備 稱取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超純水溶解并定容。 考馬斯亮蘭G250試劑 稱取100mg考馬斯亮蘭G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀釋至1升。 2. 結(jié)果與討論 2.1 校正曲線的繪制 準(zhǔn)確吸取1000ug/ml牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分別加入到6只10ml試管中，然后用超純水補(bǔ)充到0.1ml，各試管分別加入5ml考馬斯亮蘭G250試劑，混合均勻后，即可依次在595nm處測定吸光度。以濃度 為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制校正曲線如下圖，校正曲線方程為A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。 |
